牛磺酸及其來源物乙醇胺的相關(guān)檢測研究

牛磺酸是一種含硫氨基酸，廣泛分布于體內(nèi)各個組織和器官，且主要以游離狀態(tài)存在于組織間液和細胞內(nèi)液中，最先于公牛膽汁中發(fā)現(xiàn)而得名。

長期以來一直被認為是含硫氨基酸的無功能代謝產(chǎn)物，后來經(jīng)諸多研究發(fā)現(xiàn)，動物體內(nèi)所有正常生理功能的維持和調(diào)節(jié)都需要?；撬岬膮⑴c。隨著對?；撬嵘砗退幚碜饔谜J識的不斷深入 , ?；撬嶙鳛樗幬?、食品功能強化劑及飼料添加劑被廣泛應(yīng)用于人們的生活中。于是各種?；撬岬臋z測方法也就相繼被人們開發(fā)出來，今天菲羅門就?；撬岬臋z測知識為大家詳細的說明一下。

牛磺酸的檢測方法有很多，目前食品標準中常用的方法是柱前或柱后衍生化高效液相色譜法。例如現(xiàn)行國標（GB 5009.169-2016）就是使用鄰苯二甲醛 (ortho-phthalaldehyde, OPA) 柱后衍生以及單磺酰氯柱前衍生法。

一、柱后衍生法利用?；撬崤c OPA 在堿性條件下生成相應(yīng)的衍生物， 通過用熒光檢測器來測定衍生物的含量，該法具有方法穩(wěn)定、干 擾小、重現(xiàn)性較好及回收率較高等優(yōu)點。

色譜柱：MARS MNa 5u，250*4.6mm（貨號：FMG-1036-EONU）

流動相：檸檬酸三鈉溶液（稱取19.6g檸檬酸三鈉，加950mL水溶解，加入1mL苯酚，用硝酸調(diào)pH至3.10-3.25，經(jīng)0.45um微孔濾膜過濾。

流動相流速：0.4mL/min

熒光衍生溶劑流速：0.3mL/min

柱溫：55℃

柱后衍生系統(tǒng)：PCR6000柱后衍生系統(tǒng)

檢測器：熒光檢測器

檢測波長：激發(fā)波長：338nm，發(fā)射波長：425nm

進樣量：20uL

樣品圖譜

定量限0.5ug/ml圖譜

檢出限0.17ug/ml圖譜

重現(xiàn)性說明：用?；撬針藰幼鲋噩F(xiàn)性實驗，用20ug/mL濃度的標樣6針，其保留時間的相對標準偏差（RSD）是0.062%，峰面積的相對標準偏差（RSD）是0.126%。

二、質(zhì)譜直接檢測?；撬帷?/span>因衍生以及其它離子對試劑方法的麻煩之處，以及無法直接用質(zhì)譜分析的原因。菲羅門采用智能混合柱Comixsil HAC開發(fā)了一個可用于質(zhì)譜檢測器上直接檢測?；撬岬膽?yīng)用。如下：

色譜柱：Comixsil HAC 3u 100*3.0mm（貨號：FMD-HAC3-YONU）

流動相：乙腈：水：100mM甲酸銨 pH3=75：13：12

流速：0.6mL/min

檢測器：ELSD，45℃

此方法可兼容ELSD, CAD, MS檢測器。

1. 目前，國內(nèi)外多采用乙醇胺法制備?；撬?，即由乙醇胺、硫酸等經(jīng)酯化、磺化反應(yīng)，再經(jīng)濃縮、分離、重結(jié)晶、烘干制成產(chǎn)品。對于單乙醇胺的檢測方法，國內(nèi)外報道的較多。在水溶液中的痕量分析法有離子對色譜分析，工業(yè)氣中的痕量分析法有衍生化氣相色譜分析，衍生化液相色譜分析，衍生化薄層色譜分析，毛細管電泳，氣相色譜分析，離子排阻色譜分析等。

   在此，我們分享以下直接關(guān)于HPLC法檢測乙醇胺的液相應(yīng)用。

   1.可在常規(guī)HPLC上配備ELSD或CAD檢測器直接檢測

   色譜柱：Comixsil RP-100 5u 100*3.0mm（貨號：FMD-100R5-YONU）

   流動相：20mL乙腈+979mL+1mL TFA

   流速：0.6mL/min

   樣品濃度：0.5mg/mL

   進樣量：2uL

   檢測器：Corona CAD（電霧式檢測器）

    

    

   2.可在常規(guī)HPLC上配備MS檢測器直接檢測

   色譜柱：Comixsil RP-100 3u 150*2.1mm（貨號：FMF-100R3-BONU）

   流動相：乙腈：40mM 甲酸銨（pH3.0）：水=10：50：40或者預混

   流速：0.2mL/min

   樣品濃度：0.1mg/mL

   進樣量：2uL

   檢測器：MS

    

   可提高有機相比例以及降低緩沖鹽濃度時，可以獲得更高的靈敏度。當沒有其他化合物需要同時分離，可以選擇50mm長度的色譜柱而進一步提高分析效率。

    

   以上信息供參考！